Pregătirea reactivului Schiff. Metoda Schiff - acid iodic. Metoda Schiff - Acidul iodic

21.11.2019

Reactiv Schiff.

Ce este asta

Reactivul Schiff este o soluție care se combină chimic cu aldehide pentru a forma un produs roșu aprins. Strict vorbind, cetonele reacționează de asemenea, dar în toate scopurile practice pot fi ignorate. Multe componente tisulare pot fi colorate în acest fel. Reactivul lui Schiff este obținut din parasanilină tratată cu acid sulfuric (H2SO3). Acesta este motivul distrugerii cromoforului prin adăugarea unei grupe de acid sulfonic la carbonul central. Acidul sulfuric se formează prin dizolvarea dioxidului de sulf (SO2) în apă.

În unele texte, de obicei vechi, veți găsi reactivul Schiff la care se face referire leykofuksin . prefix lejko mijloace alb și se referă la pierderea culorii soluției. Cu toate acestea, leucobase se referă la compuși redusi, iar culoarea sa este restabilită prin oxidare. Reactivul lui Schiff nu are culoarea pararosanilinei în original. Mai degrabă, o nouă compoziție de culoare este făcută prin combinația chimică cu aldehidă. Din acest motiv, se numește de obicei denumirea Reactiv Schiff sau acidul fusulfuric.

Nu pare să existe prea multe diferențe în ceea ce privește sursa de acid sulfuric. Pentru că este pur și simplu dioxid de sulf dizolvat în apă. Există mai multe modalități de a obține. Patru tratamente recomandate:

· Gazul cu dioxid de sulf din cilindru este răspândit lent prin soluția de pararosanilină până când soluția începe să își schimbe culoarea. Apoi, recipientul este închis cu atenție și păstrat într-un loc întunecat, de obicei până dimineața sau mai mult.

· Se achiziționează o soluție gata de acid sulfuric. Pararosanilina este solubilă în ea fără temperatură ridicată. Apoi, recipientul este închis cu atenție și păstrat într-un loc întunecat, de obicei până dimineața sau mai mult.

Soluția de pararosanilină se adaugă metabisulfit de sodiu sau potasiu sau sulfit (ale căror probe comerciale sunt, evident, alcătuite mai ales din metabisulfit). Se adaugă acid clorhidric, producând dioxid de sulf în soluție. Apoi, recipientul este închis cu atenție și păstrat într-un loc întunecat, de obicei până dimineața sau mai mult.

La soluția de pararosanilină se adaugă reactivi care se descompun într-o soluție care produce dioxid de sulf, cum ar fi hidrosulfitul de sodiu (dionionit) sau clorura de tionil. Apoi, recipientul este închis cu atenție și păstrat într-un loc întunecat, de obicei până dimineața sau mai mult.

Reactivul lui Schiff ar trebui să fie incolor sau galben foarte pal. Cu toate acestea, pararosanilina poate conține alți coloranți, mai ales dacă provin dintr-un eșantion de fuchsină de bază, care este un amestec. Alți coloranți sunt de obicei reprezentați de omologi ai pararosanilinei, cum ar fi rosanilina și magenta II, dar produc soluții profunde de chihlimbar și pot colora aldehidele în culori roșu-brun. Aceste produse mai întunecate pot fi îndepărtate adăugând o cantitate mică de pudră de cărbune activat, agitând soluția timp de un minut și filtrând. Uneori acest tratament nu funcționează, iar soluția rămâne brună. Din păcate, dacă se adaugă suficient cărbune pentru a îndepărta complet tot maro prin decolorare, soluția limpede finală nu poate oferi decât o culoare foarte palidă. Acest lucru înseamnă de obicei că a fost utilizat un eșantion de fuchsin de bază, care conține cantități mari ale unuia dintre ceilalți coloranți. Dacă este posibil, cumpărați eșantioane de fuchsină de bază indicate ca adecvate pentru reactivul Schiff sau cumpărați pararosanilină.

După cum s-a menționat mai sus, reactivul lui Schiff se combină cu aldehide pentru a produce un produs roșu aprins. În histologie, aceste aldehide sunt atașate sau formate din structuri tisulare, colorate într-o culoare roșie foarte strălucitoare. Pentru toate aldehidele din țesuturi, mecanismul este același. Aldehida este condensată cu reactivul lui Schiff pentru a forma un nou compus, care se unește cu țesutul. În acest proces, cromoforul este convertit și produce culoare.

Acidul fusulfuric. Reactiv Schiff

aldehidă

Formula obișnuită a produsului.

Formula produsului alternativ.

Rețineți legăturile duble convertite în produs (evidențiate cu roșu) datorită adăugării de aldehidă.

Noul produs roșu este prezentat în două formule. Primul oferă majoritatea explicațiilor - acesta este produsul final. Cu toate acestea, unele texte oferă o perspectivă alternativă care implică o aldehidă. În orice caz, produsul colorat este format din reactivul Schiff, aldehida și reactivul de care este atașată aldehida. Kiernan a spus că studiile recente indică faptul că produsul este diferit de cel de mai sus și există ca un tautomer al celor două produse prezentate mai jos.

Se pot folosi alți coloranți pentru a face reactivi de tip Schiff. Acestea sunt adesea denumite pseudo-Schiff reactivi. De obicei, acestea sunt colorate, nu sunt complet decolorate, deși culoarea și transparența soluției se schimbă adesea. Este posibil ca compozițiile reziduale de culoare din aceste soluții să poată țesut țesuturile prin mecanismul ionic. Pentru a elimina această culoare, se obișnuiește tratarea secțiunilor cu alcool acid după vopsire. Orice culoare rămasă după tratamentul cu alcool acid este o reacție pozitivă din reactivul pseudo-Schiff.

Niciunul dintre acești reactivi pseudo-Schiff nu a obținut distribuție, care se apropie mai mult sau mai puțin de popularitatea reactivului pararozanilină de Schiff, iar această soluție rămâne standardul. Motivul este o culoare roșie strălucitoare și clară cu un reactiv Schiff. Alți coloranți dau o culoare slabă, deși puțini sunt cu adevărat eficienți. Soluțiile mai răspândite sunt realizate cu un colorant fluorescent, acriflavină (vezi mai jos). Acestea fac posibilă obținerea unui rezultat pozitiv fluorescent, care poate fi foarte util pentru a expune materiale precum ciuperci, de exemplu, care pot fi prezente în cantități mici.

Culingul oferă o listă a multor dintre acești coloranți, dintre care mai multe sunt enumerate aici. Pentru mai multe informații, consultați scrierile Kasten enumerate mai jos Culing.

*Prenume*	*CI nr.*	*culoare*	*Prenume*	*CI nr.*	*culoare*
Sour Fuchsin		violet	acriflavine

Violet de cristal		Albastru-violet.	Violet de metil		violet.
Albastru de metilen			Safranin Oh
			Toluidino albastru

Când țesuturile sunt îndepărtate din reactivul Schiff și spălate, ele sunt inevitabil transferate în lichidul de spălare. Dacă se utilizează apă de la robinet, reactivul își schimbă rapid culoarea și apa devine roșie. Inițial, a existat o anumită îngrijorare că acest reactiv Schiff re-colorat s-ar comporta ca un colorant primar și un țesut de colorare, dând rezultate pozitive false. Din acest motiv, s-au recomandat clătiri de sulfit. Ele dizolvă acidul sulfuric și sunt folosite pentru a spăla reactivul Schiff timp de câteva minute, dizolvându-l suficient de bine înainte de a spăla țesuturile în apă, asigurându-se că nu există probabilitatea unei colorații non-aldehide. Experiența de mulți ani a arătat că aceste clătiri nu sunt necesare și o spălare bună în apa de la robinet este satisfăcătoare dacă secțiunile nu rămân în reactivul Schiff, care a restabilit culoarea.

Dacă se folosește un reactiv pseudo-Schiff, secțiunile trebuie tratate cu 1% acid clorhidric în 70% etanol timp de 5-10 minute după această spălare. Unele dintre ele sunt pătate, nu pot fi decolorate complet și pot fi vopsite prin mecanismul ionic. Alcoolul acid elimină orice astfel de culoare. După tratamentul cu alcool acid, secțiunile trebuie spălate cu apă de la robinet, ca de obicei.

Deși reactivul Schiff este utilizat pentru a detecta aldehide, acestea nu sunt de obicei găsite libere în țesuturi și trebuie produse într-un fel. Există trei moduri în care se poate face acest lucru. Prima, și cu siguranță cea mai frecventă, oxidarea anumitor componente tisulare. Aceasta produce grupuri de aldehide, permițând afișarea materialului la care este atașată componenta. Al doilea mod este de a trata secțiunile cu acizi pentru a transforma o parte din dezoxiriboză în ADN și aldehide și apoi colorați-le cu reactivul lui Schiff. În al treilea rând - trebuie să atașați aldehida direct la țesuturi, de obicei o proteină, apoi demonstrați aldehida cu reactivul Schiff.

Aceasta din urmă poate fi observată cu ușurință prin fixarea glutaraldehidei pentru microscopie ușoară. Glutaraldehida are două grupe de aldehide și, dacă moleculele sunt atrase de țesutul uneia dintre ele, cealaltă rămâne nelegată atunci când fixarea este completă. Din această cauză, cu orice procedură folosind reactivul Schiff, aldehidele unice vor reacționa cu acesta, producând un fundal roz profund. Deci, înainte ca reactivul Schiff să poată fi aplicat pe aceste felii, aldehidele trebuie blocate, astfel încât acestea să nu poată reacționa.

Pentru orice aplicație precisă, folosind acest reactiv, trebuie utilizate două comenzi. Prima este felia pe care a fost aplicată blocarea aldehidei. Al doilea este o felie în care reactivul lui Schiff a fost aplicat pe țesătură fără nicio pretratare. Prima felie blochează astfel oricare aldeide existente anterior, în timp ce a doua evidențiază locurile unde au fost localizate. În plus, desigur, trebuie utilizate secțiuni cu controale negative și pozitive stabilite pentru elementul țesutului țintă. Dacă aceste două ultime controale nu sunt pătate, așa cum era de așteptat, atunci reactivul Schiff și nici alții nu trebuie examinați pentru a se asigura că nu s-a deteriorat și este potrivit pentru utilizare.

Istochimie: teoretică și aplicată Ed. 3 Pearse, A. G. E., 1968, 1972, v. 1, p. 488 Churchill Livingstone, Edingburgh, Londra, Marea Britanie

Metode histologice și histochimice: Teorie și practică Ed. 3 Kiernan. J. A., 1999, p. 203 Butterworth Heinemann Oxford, Marea Britanie.

Manual de tehnici histopatologice și histochimice Ed. 3 Culling C. F.A., 1974, p. 249, 250 Butterworth London, Marea Britanie.
cita: Kasten, F. H., 1958 Stain Technology, vol. 33, p. 39 și Kasten, F. H., 1959
Histochemie, vol. 1, p. 466 Tehnica histopatologică și histochimia practică Ed. 2 Lillie, R. D., 1954 Blakiston New York, SUA.

http: // spotsfile. info / StainsFile / pata / schiff / schiffwhatis. htm

Reacția acidului periodic - Schiff

Acid periodic - Schiff reacția (SIC) este utilizată pentru a demonstra prezența a 1,2 glicoli și, prin urmare, este o metodă importantă în histochimia carbohidraților și demonstrarea histologică a multor structuri.

soluţii
1% acid acid periodic
reactiv Schiff
Gemalaun Mayer

Fixare și cablare

Majoritatea zăvoarelor și metodelor de cablare sunt satisfăcătoare.
Fixarea glutaraldehidei necesită blocând aldehide înainte de a picta.

metodă

1. Aduceți secțiuni în apă prin xilen și etanol.

2. Se introduce în acid periodic timp de 10-30 de minute.

3. Clătiți bine în apa de la robinet.

4. Clătiți în apă distilată.

5. Puneți în reactivul Schiff timp de 10-30 de minute.

6. Spălați cu apă distilată.

7. Spălați bine în apa de la robinet timp de aproximativ 10 minute.

8. Se termină cu hemalaun Mayer timp de 2 minute.

9. Spălați bine cu apă de la robinet până când hemalaunul lui Mayer devine albastru.

10. Deshidratați cu etanol, clarificați cu xilen și închideți într-un mediu gumos.

Rezultate așteptate

notițe

· Fixativele glutaraldehide eliberează grupuri de aldehide libere prin atragerea lor către țesuturi. Ele provoacă o reacție completă fals pozitivă. Aceasta trebuie oprită din reacție printr-o procedură adecvată, cum ar fi blocarea anilinei-oțetului.

· Apa de la robinet la pasul 7 este necesară pentru dezvoltarea roșului. În anumite limite, o clătire mai lungă produce o culoare mai închisă.

· Inițial, s-a recomandat spălarea reactivului Schiff prin dizolvarea acidului sulfuric (clătirea cu sulfit). Atâta timp cât apa întoarce culoarea reactivului Schiff, se credea că apa spălată poate duce la falsuri pozitive. Se știe acum că acesta nu este cazul dacă reactivul Schiff este îndepărtat rapid și secțiunile nu rămân în apa contaminată cu ele mult timp.

Următoarea listă, compilată și de Culling, oferă materialele CHIC-pozitive întâlnite frecvent, deși nu este exhaustivă:

Acumularea de actinomicete.

· Membranele subsolului.

· Cerebro

Colagenul țesutului conjunctiv areolar.

· Lipide compuse.

· Glicogenul.

Kerazin (boala Gaucher).

· Tubule renale.

Granule de megacariocite.

· Mucinele:

§ tractul intestinal,

§ glande pepsine,

§ glandele colului uterin,

§ glandele salivare,

§ conjunctiva,

§ glandele bronșice,

§ foliculii și chisturile ovariene,

§ secretia glandelor prostatice,

§ corpuri amiloide,

Capsula lentilei ochiului.

· Granule pancreatice zimogene.

· Granule cu celule Paneta (șobolani, porci guineeni, iepuri).

· Fosfolipide.

· Cells-celule ale glandei hipofizare.

· Distribuții hialine renale.

Bastoane de retină.

· Russell Taurus.

· Amidon.

Coloid tiroidian.

cita: Hotchkiss, R. D., 1948 Arh. Biochem, vol 16, pp. 131

http: // spotsfile. info / StainsFile / pata / schiff / pas-standard. htm

Ultima actualizare august 2003.

Polizaharidele sunt zaharuri cu molecule mari, care se găsesc în țesuturile corpului, atât sub formă pură (glicogen), cât și în combinație cu alte substanțe (glicoproteine, proteoglicani).

Cele mai frecvente metode pentru detectarea polizaharidelor sunt: \u200b\u200bcolorarea obiectelor cu carmină în conformitate cu reacția Best și SEC.

1. Detectarea prin carmină conform celei mai bune metode este o metodă empirică și nu îndeplinește cerințele histochimice stricte. Este utilizat pe scară largă în practica histochimică datorită accesibilității și luminozității sale. Metoda se bazează pe colorarea secțiunilor, încorporate în parafină sau celloidină, cu o soluție apoasă de carmină. Drept urmare, glicogenul pătează o culoare roșie strălucitoare. Atunci când este colorat cu carmin, pe lângă glicogen, pot fi colorate unele granule celulare, mucus, jante cuticulare ale epiteliului, de aceea trebuie controlat întotdeauna cu diastază.

2. CHIC - reacție (SHIFF-acid iodic). Metoda se bazează pe faptul că periodatul de potasiu, atunci când este expus la polizaharide, oxidează selectiv grupele alcoolice ale atomilor de carbon din partea hexosei, transformându-le în aldehidă. Grupurile aldehide libere reacționează apoi cu acid sulfurat fuchsin pentru a da o culoare violet-cireș.

Pregătirea soluțiilor:

1. Reactivul lui Schiff (acid sulfuric fuchsin. 1 g de fuchsină de bază se dizolvă în 200 ml de apă distilată (temperatura camerei), agitând bine timp de 3-5 minute. Soluția este filtrată printr-un filtru de hârtie, 10 ml de acid clorhidric 1N și 1 se adaugă la filtrat. g de metabisulfit de potasiu sau sodiu O soluție într-un balon bine închis este plasată într-un loc întunecat timp de 24 de ore După decolorarea fuchsinei, reactivul devine gălbui sau maro în funcție de calitatea principalului fuchsin. se adaugă 3-5 comprimate zdrobite de carbon activat, se agită bine și se filtrează într-o sticlă cu un dop măcinat.Este mai bine să se păstreze reactivul în frigider Pentru a verifica calitatea reactivului Schiff obținut, se toarnă 5 ml de reactiv în sticlă și i se adaugă 1 picătură de formalină acid nediluată. Dacă reactivul are o calitate excelentă, atunci dobândește culoarea principalului fuchsin înaintea ochilor noștri.

2. Apa de sulf. La 200 ml apă distilată se adaugă 10 ml soluție 10% de hidrosulfit de sodiu (Na2SO3) și 10 ml 1 N. soluție de acid clorhidric. Apa sulfuroasă este preparată înainte de utilizare și ar trebui să aibă un miros caracteristic de dioxid de sulf (anhidridă sulfuroasă (SO2).

Metode de colorare a medicamentelor:

1. Materialul este fixat în 10% formalină, lichide Carnoy, lichide Zenker, turnate în parafină.

2. Secțiunile uzate sunt aduse în apă distilată.

3. La temperatura camerei, secțiunile sunt oxidate cu 0,5-1% periodat apos de potasiu timp de 2-10 minute. Soluția este păstrată la întuneric. Concentrația de lucru a acestei soluții și timpul de incubație în ea sunt selectate în funcție de obiect.

4. Spălat în apă distilată timp de 10 minute.

5. Puneți feliile într-un reactiv Schiff timp de 10-30 de minute la temperatura camerei la întuneric.

6. Secțiunile se spală cu dioxid de sulf de trei ori timp de 2 minute. Apa de sulf poate fi de asemenea preparată (imediat înainte de reacție).

7. Spălate bine în apă curgătoare și distilată, miezurile pot fi repictate cu 0,5% verde deschis sau hematoxilină.

8. Deshidratați în concentrații crescânde de alcooli, închideți într-un balsam.

Rezultat: glucidele care conțin hexoză sunt colorate roșu-violet, glicogen - într-un roșu închis mai intens.

Control: descompunerea glicogenului prin amilază sau diastază, reacție de acetilare pentru blocarea grupărilor hidroxil.

Este necesar să folosiți vase curate chimic, bețe de sticlă; Nu lucrați cu cârlige sau ace metalice; Colorarea de reactiv Schiff trebuie făcută pe întuneric.

Cu detectarea abundentă a unei substanțe pozitive SEC, citoplasma celulelor este colorată omogen în culoarea violet-cireș.

(N. Schiff, 1834-1915, biochimist german)

un reactiv pentru determinarea calitativă a grupului de aldehide de substanțe organice, care este o soluție de acid fuchsulfuric; utilizat pentru detectarea histochimică a carbohidraților și acidului dezoxiribonucleic.

- un reactiv pentru detectarea glucozei în urină, care este o soluție apoasă de sulfat de cupru, citrat de sodiu și carbonat de sodiu ...
Enciclopedia medicală
- un reactiv care conține cloroglucinol, vanilină și alcool, utilizat în determinarea calitativă a acidului clorhidric din stomac ...
Enciclopedia medicală
- un amestec de alcool etilic, acizi acetic glacial și acizi hidroiodici, utilizat în medicina criminalistică pentru a detecta sângele pătat ...
Enciclopedia medicală
- un reactiv care conține 2,5 g acid oxalic, oxalat de amoniu și acid acetic glacial la 150 ml soluția lor apoasă ...
Enciclopedia medicală
- un reactiv pentru determinarea calitativă și cantitativă a aldehidelor, cel mai simplu zaharuri reducătoare și unele alte substanțe din fluidele biologice ...
Enciclopedia medicală
- un amestec de soluții de sodiu tungstat și molibden, la care se adaugă acid fosforic, clorhidric și, după fierbere, sulfat de litiu, precum și câteva picături de apă de brom ...
Enciclopedia medicală
- a, m. chem. O substanță care provoacă o anumită reacție caracteristică în combinație cu o altă substanță și, astfel, vă permite să detectați prezența acesteia din urmă în această compoziție ...
Mic dicționar academic
- ...
Cuvântul rusesc stres

Schiff Reagents în cărți

Numărul testului 2.

autorul Khakamada Irina Mitsuovna

Numărul testului 2. Arta înșelăciunii este de a menține proporția dintre adevăr și fals. Cinci picături pe pahar. Apoi minciuna este ușor înghițită și bine absorbită. Politicianul trebuie să poată adsorbi realitatea din ficțiune pentru a identifica motivul și sursa. Acum voi spune

Numărul testului 3

Din cartea SEX în politica mare. Femeie făcută de sine autorul Khakamada Irina Mitsuovna

Testul nr. 3 Ce nu poate fi salvat în timpul campaniei electorale? 1. Pe afișe și pliante de propagandă.2. În presă și televiziune.3. La recunoaștere.4. La evenimente publice.Răspunsul corect: desigur, pe informații. Trebuie tratată pe parcursul campaniei. Deci, în

Numărul testului 2.

Din cartea SEX în politica mare. Femeie făcută de sine autorul Khakamada Irina Mitsuovna

Testul nr. 2. La o recepție la nivel înalt, au pus un vas mare de porțelan cu un lichid limpede și o felie de lămâie lângă cel de-al doilea vas. Ce este și cum să faci față? 1. Acesta este ceaiul, ceea ce înseamnă că trebuie băut. Aceasta este apă pentru clătirea mâinilor, ceea ce înseamnă că trebuie clătite. Este

Numărul testului 2

Din cartea SEX în politica mare. Femeie făcută de sine autorul Khakamada Irina Mitsuovna

Testul nr. 2 Ai venit la birou pentru a semna o hârtie importantă pentru tine. Și brusc, proprietarul biroului încuie ușa cu o cheie, te bate pe canapea și, scaldându-ți fața cu respirație hipertensivă, îți oferă schimbul ca autograful tău să întrețină relații sexuale cu el. Ce mai faci?

test

Din cartea de bucate a Cenușăresei autor Vaksa Olga

TEST

Din cartea Jocul ca fenomen cultural autor Guzik M. A.

TEST Test este un joc fascinant și informativ și este o formă eficientă de testare a cunoștințelor pe o varietate de probleme. Testele oferite studenților se bazează pe materiale de lectură și pe lucrări independente la disciplina „Joc ca

test

Din cartea Aproape de mare autor Andreeva Julia

Testare Distras brusc de la un laptop de o fată necunoscută, în vârstă de aproximativ nouă ani. Fie m-am apropiat liniștit, fie, ca de obicei, m-am cufundat în text atât de mult, încât nu am văzut și nu am auzit nimic. Sunt pe stradă, în parcul sanatoriului Zarya, lângă Sankt Petersburg. Da, locul este stabilit. Deși percepția adecvată

test

Din cartea Fundamente ale logisticii autorul Levkin Grigory Grigoryevich

Test 1. Din punct de vedere al abordării logistice, obiectul managementului la nivel macro este: a) un serviciu de vânzări; b) un serviciu de aprovizionare; c) prin fluxul de materiale.2. Logistica a venit în economie din sfera: a) construcției; b) medicamentelor; c) afacerilor militare; d) comerțului

5.3.1. Faza de recrutare scurtată - testare, testare, testare ...

Din cartea Un manual pentru principaliștii începători. 84 de pași spre succes autorul Khimich Nikolay Vasilievici

5.3.1. O fază de recrutare prescurtată - un test, un test, un test ... Una dintre metodele de recrutare a persoanelor este o fază de recrutare prescurtată folosind metoda de testare. Esența sa constă în faptul că, atunci când contactați un solicitant adecvat, cereți-i să efectueze sarcini de testare. Este de dorit

Ce se va întâmpla cu directorul și managerul de testare

Din cartea Cum se testează pe Google autorul Whittaker James

Ce se va întâmpla cu directorul de testare și managerul de teste Cum vor afecta toate aceste schimbări bazate pe rol managerii de testare, directorii și vicepreședinții? Vor fi mai puțin. Cei care au cunoștințe tehnice vor trece la alte roluri care sunt mai potrivite pentru inginerie

2.4. Dezvoltarea unei poziții active. Test 3. Cât de bine pot comunica cu oamenii? Test 4. Cât de puternic sunt un lider?

autorul Azarova Olga Nikolaevna

2.4. Dezvoltarea unei poziții active. Test 3. Cât de bine pot comunica cu oamenii? Test 4. Cât de puternic sunt un lider? Toate trestiile din păpuși sunt la fel ca aspect, Dar zahărul este obținut dintr-o trestie, Și doar o mată de la cealaltă. Jawahir al-Asmar TEST 3. Cât de bine sunt

3.3. Atmosfera generală a negocierilor. Discuție, persuasiune, compromis. Contactați-ne. TEST 5. Cum pot vorbi? TEST 6. Cum pot asculta?

Din cartea Small Tricks of Big Business autorul Azarova Olga Nikolaevna

3.3. Atmosfera generală a negocierilor. Discuție, persuasiune, compromis. Contactați-ne. TEST 5. Cum pot vorbi? TEST 6. Cum pot asculta? Regula de Aur: Nu este ceea ce am spus că contează, ci ceea ce au auzit alții. Atmosfera generală a negocierilor. Pe lângă cele speciale și

Numărul testului 9 Test SPILBERGER-KHANINA. EVALUAREA STATULUI EMOȚIONAL (NIVELUL ANXIȚIEI REACTIVE ȘI PERSONALE)

Din cartea Psihologie de afaceri autorul Morozov Alexandru Vladimirovici

Numărul testului 9 Test SPILBERGER-KHANINA. EVALUAREA STATULUI EMOȚIONAL (NIVELUL ANXIȚIEI REACTIVE ȘI PERSONALE) Acest test determină nivelul de anxietate în momentul execuției sale (RT), ceea ce reflectă reacția la o situație și un nivel momentan de scurtă durată.

Test VM (test indicativ de maturitate școlară - gândire verbală)

Din cartea obiceiurile rele ale copiilor buni autorul Barkan Alla Isaakovna

Test BM (test indicativ de maturitate școlară - gândire verbală) I. Irazek Care animal este mai mult - un cal sau un câine? Cal \u003d 0, răspuns greșit \u003d -5. Dimineața avem micul dejun, iar la prânz ...? Pranz. Mâncăm supă, paste și carne \u003d 0. Avem o gustare după-amiază, cină, somn, etc. greșit

Test la nivel kinestezic sau K-Test

Din cartea de ridicare. Tutorial despre seducție autorul Bogachev Filip Olegovici

Testul la nivel kinestezic sau Revistele K-Test pentru bărbați nu oferă prea multe sfaturi despre sex, așa cum consideră bărbații: „Știu deja ce să fac. Dați-mi o femeie goală!” Jerry Seinfeld. Imaginează-ți că ai plecat departe de casa ta, să zicem, la kilometri mai departe

Metoda Schiff - Acidul iodic

Metoda Schiff - acid iodic este utilizată pentru a detecta glicogenul și MPS neutru. Cea mai comună modificare este Hotchkiss și MacManus.

Fixarea și metodele de preparare a feliilor sunt diferite. Secțiunile din apă distilată sunt transferate timp de 15 min într-o soluție de sodiu sau neodat de potasiu (350 mg de potasiu sau de periodat de sodiu + 50 ml de apă distilată + 0,5 ml de acid azotic 35%), apoi se clătesc rapid în două porțiuni de apă distilată și se pun timp de 5 min. într-o soluție de apă sulfuroasă (1,5 g metabisulfit de sodiu + 300 ml apă distilată + 15 ml 1 și o soluție de acid clorhidric). După aceea, este transferat pe reactivul lui Schiff timp de 30-60 de minute și din nou în apă sulfuroasă (trei porții de 5 minute fiecare).

Apoi sunt păstrate în apă distilată până când secțiunile devin roșii, nucleele sunt colorate cu hematoxilină Erlich diluată la culoarea Madeira și spălate timp de 5 minute în apă de la robinet până când secțiunile devin albastre.

Sunt clătite cu apă distilată, trecute prin alcooli ascendenți (70, 96, 100%), iluminate în xilen timp de 10-12 ore, închise în balsamul canadian. Pentru a identifica glicogenul și MPS-ul neutru, secțiunile de control au fost tratate cu saliva amilază sau diastază înainte de colorare, apoi colorate așa cum s-a descris mai sus.

Pregătirea soluției Schiff

1 g de fucsină de bază, măcinată într-un mortar, se plasează în 200 ml de apă distilată clocotită, se agită 5 minute, se răcește la 50 ° C, se filtrează, se adaugă primele 20 ml de 1 N. o soluție de acid clorhidric (clorhidric), răcită la 25 ° C, apoi 1 g de metabisulfat de sodiu sau de potasiu.

Se lasă la întuneric timp de 14-24 de ore, apoi se adaugă 2 g de carbon activat, se agită timp de 1 min, se filtrează din nou și se pune la frigider. Soluția ar trebui să fie incoloră. Se recomandă prepararea imediată a apei cu sulf, cu potasiu sau sodiu.

„Diagnosticul patomorfologic al bolilor de piele”,
G. M. Tsvetkova, V. K. Mordovtsev

Fixarea este diferită. Secțiunile de parafină pentru o zi sunt plasate într-o soluție de peroxid de hidrogen 3%, apoi timp de 15 - 20 min în hematoxilină carbolică (hematoxilină 1,75 g + 200 ml apă distilată + 5 g acid carbolic cristalin + 10 ml 10% acid fosforic de tungsten), clătite apă distilată, diferențiați într-o soluție de 10% acid fosforic-tungsten (până la 1 zi), câteva ore ...

Bucățile zdrobite sunt pre-fixate în 4% glutaraldehidă, tamponate cu tampon de cacodilat 0,1 M (pH 7,3) timp de 2 ore la 4 ° C. Utilizarea unui tampon fosfat 0,1 M (pH 7,3) dă rezultate bune. Apoi bucățile sunt spălate într-o soluție de zaharoză 0,2 M în tampon de cacodilat timp de 12 ore și fixate timp de 2 ore ...

Fixarea nu este deosebit de importantă, secțiunile pot fi preparate pe un microtom de congelare, precum și după turnarea în parafină. Înainte de colorare, acestea sunt plasate într-o soluție izotonică de clorură de sodiu timp de 3 ore la o temperatură de 37 ° C, apoi transferate într-o soluție de 0,5% toluen albastru timp de 18 ore. După aceasta, secțiunile sunt spălate rapid cu apă distilată de trei ori înlocuită, uscate prin filtru ...

O biopsie a pielii se realizează cel mai bine cu o circulară completă, care simplifică mult colectarea materialului și nu dăunează zonelor adiacente. Fixarea corectă și prelucrarea ulterioară a unei bucăți de biopsie a pielii sunt de mare importanță pentru diagnosticul patologic. Cel mai bun fixativ pentru scopuri histologice normale este 10% formalină neutră. Cantitatea sa trebuie să depășească de 50 de ori volumul biopsiei. Deci, o probă de biopsie 1 X ...

Metodele de cercetare histochimice sunt utilizate în principal în scopuri științifice, cu toate acestea, unele dintre ele au o valoare diagnostică, cum ar fi, de exemplu, reacția SIR, colorarea cu albastru Alcian sau albastru toluidin, azane prin metoda Heidenhain etc. Polizaharidele sunt dezvăluite folosind reacția SIK: glicogen și muconolizaharide (MPS), în special neutre. Această reacție este necesară pentru a determina fibrinoidul și fibrina SEC pozitive. Ciuperci și chitinoase ...

Reacția Felgen indică prezența ADN-ului, prin urmare poate fi folosită în principal pentru a constata prezența sau absența nucleelor \u200b\u200bîn celule, dimensiunea, forma, locația lor, etc. În plus, intensitatea colorației poate oferi indicații indirecte ale modificărilor cantitative ale ADN-ului.

Reactivul lui Schiff - acidul fusulfuric - este un reactiv caracteristic pentru aldehide. Proprietatea reactivului lui Schiff de a interacționa cu grupele de aldehidă se bazează pe reacția lui Felgen cu acest reactiv pe ADN. Cu toate acestea, deoarece grupele aldehide sunt legate în molecula de ADN, ele trebuie mai întâi eliberate. Acest lucru este obținut prin hidroliza ADN-ului cu un acid slab, care desface bazele purinei (adenină, guanină) din molecula ADN și formează restul moleculei de ADN cu grupări aldehide libere:

Modificări apar la primul atom de carbon al dezoxiribozei; la punctul de separare a bazelor purinice, este detectată o potențială grupă aldehidă. Când. această formă furanoză de dezoxiriboză se transformă într-o formă de zahăr non-ciclic. În timpul reacției, o moleculă de acid fusulfuric se alătură celor două grupe de aldehidă de dezoxiriboză.

Acidul sulfuric Fuchsin (leucofuksin) este obținut dintr-o soluție acidă de fuchsin bazică (parafuxină) în 1 N. acid clorhidric atunci când este saturat cu dioxid de sulf. Anhidridă de sulf este formată prin interacțiunea acidului clorhidric cu bisulfitul de sodiu, care sunt introduse într-o soluție acidă de fuchsină de bază:

HCl + NaHSO3 \u003d NaCl + SO2 + H20

Când dioxidul de sulf este trecut într-o soluție de fuchsin, două legături duble sunt rupte, într-unul din cele trei inele aromatice ale fuchsin, grupul quinoid dispare și odată cu aceasta culoarea roșie lila caracteristică fuchsinei. Acidul fusulfuric este un compus fragil, incolor.

Prepararea acidului sulfurat fuchsin din fuchsin de bază se desfășoară după cum urmează: fuchsina, reacționând cu acid clorhidric, formează un compus complex, care apoi reacționează cu acidul sulfuric în felul următor:

Astfel, în formarea acidului fusulfuric, două grupe (-SO 2 H) sunt atașate la fuchsină.

La reacția cu aldehide, grupa quinoidă este restabilită, deoarece acidul fucsulfuric, un compus instabil, se descompune să formeze acid sulfuric.

În interacțiunea unei molecule de acid fuchsulfuric cu două molecule de reziduuri de ADN care au grupuri aldehide goale, se obține o moleculă a compusului colorat.

Atunci când pregătiți material pentru reacția Felgen, de obicei, se recomandă fixarea alcoolului și a agenților de fixare a acidului. Cel mai utilizat dispozitiv de reținere Carnoy (p. 45). Un astfel de fixativ precipită nucleoproteinele, ceea ce duce la tipare morfologice de succes. Cu toate acestea, o lungă ședere a materialului în fixativ determină distrugerea legăturii dintre acizii nucleici și proteine, duce la o extracție treptată a acizilor nucleici și oferă o imagine distorsionată. Prin urmare, stația în zăvor ar trebui să fie limitată pe cât posibil.

reactivii

1) Reactivul lui Schiff (acid sulfuric fuchsin).

Pregătirea reactivului Schiff. Se macină 1 g de fuchsin principal într-un mortar și se dizolvă în 200 ml de apă distilată clocotită; se răcește la 50 ° C. Se adaugă 20 ml de 1 N în soluția răcită. acid clorhidric * și se răcește la 25 ° C. Adăugați 1 g de bisulfit sau metabisulfit de sodiu. Agitați amestecul rezultat cu carbon activat (de la 1 la 3 minute) și filtrați. Se toarnă într-un vas întunecat sau învelit în hârtie întunecată, închideți-l cu un dop măcinat și așezați-l la întuneric timp de 12 sau mai multe ore, până când fuchsinul principal este decolorat și se formează acid fuchsulfuric.

* (1 n acidul clorhidric corespunde unei soluții de 10% preparate din acid clorhidric concentrat (greutatea specifică 1,19))

2) Apa de sulf.

Pregătirea apei cu sulf. La 200 ml de apă distilată se adaugă 20 ml de 1 N. acid clorhidric și 1 g de bisulfit de sodiu.

3) 1 n. acid clorhidric.

4) Medii pentru deshidratarea obiectelor și concluzia lor în balsamul canadian (p. 66-70).

5) Balsam canadian.

reacție Efectuarea

* (Consultați nota de subsol la pagina 118.)

1. Introduceți preparatele în 1 N. acid clorhidric timp de câteva secunde.

2. Transferați-le la preîncălzit la 60 ° C 1 N. HCl și se introduc într-un termostat la o temperatură de 60 ° C (sau într-o baie de apă cu aceeași temperatură) timp de 5-10 minute *.

* (Durata hidrolizei depinde de fixativul utilizat. Când folosiți fixativul și formalina lui Carnoy, timpul optim este de 8 minute.)

3. Clătiți la rece 1 n. HCI.

4. Așezați-le în reactivul Schiff timp de 1 oră.

5. Spălați excesul de reactiv al lui Schiff cu apă cu dioxid de sulf (3 schimburi de 3-5 minute).

6. Clătiți preparatele în apă de la robinet timp de 5-10 minute, înlocuind apa începând să se înroșească.

7. Aduceți preparatele la balsam prin 96%, 100% alcool, un amestec de alcool cu \u200b\u200bxilen și xilen.

8. Observă aspectul culorii zmeurii.

Rezultatele reacției (tabelul 20)

În vârful rădăcinii de ceapă, sâmburii capătă o culoare violetă de zmeură. Nucleele zonei de întindere și, în special, absorbția par oarecum mai puțin luminoase decât nucleele zonei de fisiune. Nucleoli, citoplasme și membranele celulare rămân nevopsite.

Într-un sâmbure de porumb, rădăcinile rădăcinii, rinichilor și toate celelalte țesuturi embrionare, precum și celulele stratului de aleuron sunt colorate în culoarea caracteristică a reacției Felgen. Nucleul aplatizat și extins al celulelor endosperme sunt pătate mai palide.